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細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)非常重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)到一定程度的時(shí)候必須借助細(xì)胞耗材方能達(dá)到細(xì)胞生長所需的條件，富道細(xì)胞為大家分享一下如何使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行貼壁細(xì)胞傳代。

貼壁細(xì)胞細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。

對(duì)于貼壁不太緊的細(xì)胞如293細(xì)胞，可以直接吹散后分瓶。而對(duì)于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般過程為 （以下操作均按無菌操作的要求進(jìn)行）：

將長成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去； 加入0.25％胰酶溶液，視細(xì)胞培養(yǎng)瓶的大小加入體積為0.5ml或更多，以使充分浸潤； 一般消化時(shí)間約為1至3分鐘，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶壁半透明的細(xì)胞層，當(dāng)見到出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)，棄去胰酶溶液，并加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化；視實(shí)驗(yàn)要求分入多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)，一般為一傳二到一傳四的比例。

這里，胰酶消化的程度是一個(gè)關(guān)鍵：消化過度則對(duì)細(xì)胞的活性損傷較大，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的胰酶流失；消化不足則細(xì)胞難于從細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會(huì)損傷細(xì)胞活性。 影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等）、消化時(shí)的溫度（氣溫、細(xì)胞培養(yǎng) 瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。

這就是富道細(xì)胞為大家分享的如何使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行貼壁細(xì)胞傳代，希望對(duì)大家有所幫助。