細(xì)胞經(jīng)常會(huì)有需要凍存和復(fù)蘇的,富道細(xì)胞之前跟大家介紹了凍存管凍存細(xì)胞的操作流程,今天跟大家分享一下復(fù)蘇凍存管內(nèi)細(xì)胞的方法,首先我們要知道細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快,使之迅速通過(guò)細(xì)胞最易受損的-5~0℃,細(xì)胞仍能生長(zhǎng),活力受損不大。
1、準(zhǔn)備一個(gè)1000ml的燒壞,內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。
2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動(dòng)。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化。
3、打開凍存管,將細(xì)胞懸液吸到離心管中。
4、1000rpm離心10分鐘,棄去上清液。
5、沉淀加10ml培養(yǎng)液,吹打均勻,再離心10分鐘,棄上清液。(細(xì)胞數(shù)量少的情況下,復(fù)蘇時(shí)可省略步驟5。)
6、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,37℃培養(yǎng),第二天觀察生長(zhǎng)情況。