細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)對(duì)環(huán)境、耗材等有嚴(yán)格的要求,如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶中含有細(xì)菌內(nèi)毒素,將影響細(xì)胞的生長(zhǎng)甚至導(dǎo)致死亡。那么,我們?cè)撊绾螜z測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素呢?
細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分,當(dāng)細(xì)菌死亡或自溶后便會(huì)釋放出內(nèi)毒素。是G-菌細(xì)胞壁個(gè)層上的特有結(jié)構(gòu),內(nèi)毒素為外源性致熱原,它可激活中性粒細(xì)胞等,使之釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì),作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱。
檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中是否含有細(xì)菌內(nèi)毒素可以聽(tīng)過(guò)內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒來(lái)檢測(cè),它是利用人工合成的顯色基質(zhì)使鱟試劑產(chǎn)生的顯色反應(yīng)定量檢測(cè)內(nèi)毒素。在適宜的條件下(溫度,pH值及無(wú)干擾物質(zhì)),細(xì)菌內(nèi)毒素激活C因子,引起一系列酶促反應(yīng),激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì),使其分解為多肽和黃色的對(duì)硝基苯胺(pNA,λmax = 405nm) 。在一定時(shí)間內(nèi),pNA的生成量與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度成正相關(guān),據(jù)此,可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。
以上是檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)菌內(nèi)毒素的方法,確保耗材無(wú)細(xì)菌內(nèi)毒素是衡量其質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo),也是保證后期細(xì)胞正常生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素。