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今天富道細胞給大家介紹一種我們在細胞制備中常見的細胞那就是小鼠胚胎成纖維細胞此胚胎干細胞體外培養(yǎng)時最理想的飼養(yǎng)層，用于小鼠、人來源胚胎干細胞培養(yǎng)，也廣泛誘導多潛能干細胞（iPS）培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細胞。今天富道細胞分享一下細胞工廠對小鼠胚胎成纖維細胞的應用。

我們在使用細胞工廠培養(yǎng)細胞時候，要先進行細胞復蘇。將凍存的 MEF 從液氮中取出，浸入 37 ℃ 水浴，輕輕轉(zhuǎn)動，注意凍存管蓋不要沒入水中。當只剩一個小冰晶時，將凍存管從水浴中取出。將凍存管浸入 95％ 乙醇浴消毒，在無菌超凈臺中晾干。

將細胞從凍存管中轉(zhuǎn)入離心管中，逐滴加入 MEF-C 培養(yǎng)基，輕輕混勻（5）200 g 離心 5 min，去除凍存液。去除上清液，將細胞團輕輕拍散，加MEF-C重懸細胞。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無明膠包被的細胞工廠中。放入培養(yǎng)箱，每天觀察細胞工廠內(nèi)的細胞密度。

MEF 細胞的在細胞工廠中的傳代（按 1:5 傳代）：吸棄細胞工廠內(nèi)添加的 MEF-C。加PBS，洗一遍。吸棄 PBS。加入胰蛋白酶-EDTA 溶液，放置一段時間后直至鏡下觀察，看細胞間接觸由致密逐漸變松散。輕搖晃細胞工廠內(nèi)細胞，直至MEF細胞從細胞工廠貼壁表面脫離。加 MEF-C 中止胰蛋白酶消化?；靹蚣毎麘乙?，加入 MEF-C?；靹?/span>后分裝到每個新的細胞工廠中。