細胞傳代是細胞培養(yǎng)過程中的一步重要操作,它是指將細胞從原培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中,使細胞進一步增殖。貼壁細胞可以通過鏡下觀察,判斷傳代時機,而在細胞搖瓶中培養(yǎng)的懸浮細胞無法通過顯微鏡觀察細胞密度,那該如何判斷傳代時機呢?
細胞的生長會經(jīng)過四個階段:遲緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期、衰退期,無論是貼壁細胞還是懸浮細胞,都是在進入對數(shù)生長期,未達到混合狀態(tài)的時候進行傳代,這個時期的細胞生長迅速,呈指數(shù)勢增長。由于懸浮細胞無法通過鏡下觀察細胞搖瓶中的細胞密度,可以在細胞生長初期繪制生長曲線,以此來判斷傳代時機。
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數(shù)的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)之一。一般細胞傳代之后,會經(jīng)過短暫的遲緩期,隨后度過長短不同的潛伏期,即進入大量分裂的指數(shù)生長期。在細胞達到飽和密度后,停止生長,進入平頂期,然后退化衰亡。
確定傳代時機后,細胞搖瓶中的懸浮細胞傳代一般通過稀釋方式進行,用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3,加入適量的新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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