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培養(yǎng)基瓶中的血清儲存的五點注意事項
發(fā)表日期:2022-10-24

血清富含蛋白、生長因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素、微量元素等成分,是體外細(xì)胞培養(yǎng)所需的重要營養(yǎng)物質(zhì)之一,也是抗體藥研發(fā)人員經(jīng)常使用的原料試劑。血清的質(zhì)量直接影響實驗的進程,那么培養(yǎng)基瓶中的血清在儲存時應(yīng)該注意以下幾點 :

1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染。

2、熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻,此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活,除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量,補體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)胞收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

培養(yǎng)基瓶中的血清儲存的五點注意事項_富道細(xì)胞

3、培養(yǎng)基瓶中的血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。

4、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌,如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。

5、血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點"。經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認(rèn)為血清受污染,一般情況下,此小黑點不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。

此外還要注意,切勿將培養(yǎng)基瓶中的血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質(zhì)量。

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