細(xì)胞工廠是大規(guī)模貼壁細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)常會用到的一種耗材,主要用于制藥、疫苗生產(chǎn)、細(xì)胞治療等領(lǐng)域。那在培養(yǎng)過程中我們我們要實(shí)時掌握細(xì)胞的生長狀態(tài),根據(jù)具體情況做出相關(guān)調(diào)整??梢酝ㄟ^MTT法對細(xì)胞的活性進(jìn)行檢測,從而確定細(xì)胞生長情況。今天富道細(xì)胞來跟大家介紹一下細(xì)胞工廠中MTT法測細(xì)胞相對數(shù)和相對活力。
活細(xì)胞中的琥珀酸脫氫酶可使MTT分解產(chǎn)生蘭色結(jié)晶狀甲贊顆粒積于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞周圍。其量與細(xì)胞數(shù)呈正比,也與細(xì)胞活力呈正比。
1、細(xì)胞懸液以1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
2、沉淀加入0.5-1ml MTT,吹打成懸液。
3、37℃下保溫2小時。
4、加入4—5 ml酸化異丙醇(定容)。打勻。
5、1000 rpm離心,取上清液酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)570nm比色,酸化異丙醇調(diào)零點(diǎn)。
注意:MTT法只能測定細(xì)胞相對數(shù)和相對活力,不能測定細(xì)胞絕對數(shù)。
那這是富道細(xì)胞為大家分享的如何在細(xì)胞工廠中MTT法測細(xì)胞相對數(shù)和相對活力的辦法了