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HEK 293T細胞是我們許多科研小伙伴的入門細胞，也常被稱作“工具細胞”，實驗中常使用它來進行，慢病毒包裝生產及滴度測定，細胞轉染，條件培養(yǎng)基制作，蛋白表達驗證等試驗。而我們細胞工廠適用于工業(yè)批量生產、實驗室操作和大規(guī)模細胞培養(yǎng)的常規(guī)耗材之一。

首先先跟大家說一下細胞轉染的目的和原理

粗略理解為使用陽離子聚合物+質粒構成的復合物轉入細胞內，讓你轉入的質粒瞬時表達，產生一個短暫（約持續(xù)96h）的效應，用于短期實驗。

陽離子聚合物能夠和帶負電的質粒形成復合物，復合物穿膜（或是膜融合或是內吞）被細胞“吃掉”，從而將你的目的質粒帶入細胞內。大約在轉染完成后的48h，可以對細胞的轉染效率和蛋白表達進行檢測。

檢測時，轉染效率=檢測陽性細胞數/檢測時總細胞數*100%，一般使用流式細胞術進行檢測。

細胞工廠在HEK 293T轉染條件和過程：

以PEI用作轉染試劑的轉染為例，配制濃度為1μg/μL的PEI（配制方法網上搜索一下很好查），準備你的待轉質粒（假設濃度為也為1μg/μL=1000ng/μL）。

PEI轉染時的原則為，質量比，PEI:質粒=3:1；轉染時需要使用無血清無雙抗的培養(yǎng)基將PEI和質粒分別做成稀釋液（一般稱為A液和B液），再混合在一起方便兩者聚合。以10cmdish的轉染為例，10cm dish一般轉染10μg的質粒,那么我們需要30μg的PEI。

A液：10μL質?！?00μL無抗無血清DMEM，混勻

B液：30μLPEI→500μL無抗無血清DMEM，混勻

B液逐滴加入A液中，渦旋1min，或槍頭吹打約80次，室溫孵育15-20min，不需要再次混勻直接填加到鋪好的10cm dish中。

轉染后18h，將培養(yǎng)液更換成新鮮的DMEM完全培養(yǎng)基；轉染24-96h后檢測。

這就是細胞工廠在HEK 293T轉染的的應用了。如果有什么問題歡迎各位前來咨詢