我們在使用細胞轉瓶時都是將其固定在支加上,傾斜度為5°~10°左右,或將轉瓶放在一排排轉軸之間,使轉瓶隨著轉軸以每小時6~12 轉緩慢轉動。
細胞貼附于細胞轉瓶壁四周,細胞貼壁和生長只有一個表面面積,經轉動一方面使培養(yǎng)液流動,利于細胞吸收營養(yǎng)和進行代謝,一方面使細胞有機會接觸氣體,有利于細胞呼吸和發(fā)生氧化還原作用,有利于細胞生長繁殖。
細胞轉瓶內保持有相當大的上方空間,以維持合適的氧和pH 水平,通過轉動可使細胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣,營養(yǎng)可被充分利用。若需增加細胞產量,除可在增加轉瓶的數量和容積外,使瓶直徑盡可能小,此時表面面積可因直徑或長度的倍增而成倍增加。
轉瓶培養(yǎng)也可使用灌注培養(yǎng)系統(tǒng),因此系統(tǒng)需要錯綜復雜回旋的可連續(xù)供應的管道進入瓶內,這是一種昂貴的選擇。
我們在使用細胞轉瓶時可按照以下操作步驟:加入適量生產培養(yǎng)液于轉瓶中。加入所培養(yǎng)的細胞。在37℃下,以12轉/小時,轉動2小時,使細胞均勻貼壁。減少轉動速度至5 轉/小時并連續(xù)培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下使用長焦距物鏡檢查細胞。在細胞生長至明顯匯合時(5~6天),移出培養(yǎng)液,加入0.25%胰蛋白酶,并滾動轉瓶以收獲細胞。洗去胰蛋白酶,加入新鮮培養(yǎng)基,可轉入擴大再培養(yǎng)。為了增加表面積,有人將轉瓶表面制成帶皺紋的表面或插入多層隔板。以增加表面積。當然這是其中一種的培養(yǎng)方式,我們科研者在使用細胞轉瓶來培養(yǎng)細胞時也需要根據自身培養(yǎng)細胞來調整。
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