我們在使用細胞工廠等細胞培養(yǎng)耗材培養(yǎng)細胞時要對細胞做常規(guī)性檢查。觀察細胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據(jù)細胞動態(tài)變化,做換液或傳代處理,如發(fā)現(xiàn)異常情況應及時采取措施。一般會從以下四個方面進行觀察:
1.細胞形態(tài)
細胞工廠內生長狀態(tài)良好的細胞,在一般顯微鏡下觀察時可見,細胞透明度大、折光性強、輪廓不清。細胞生長不良時,輪廓增強,胞質中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物,細胞之間空隙加大,細胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點,如上皮細胞變成類上皮細胞等。
2. 細胞生長
初代培養(yǎng)或傳代的細胞懸液接種以后,經(jīng)過長短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細胞生長,一周內便可連接成片。接種細胞長滿細胞工廠后,應及時做再培養(yǎng)。否則由于營養(yǎng)物消耗和代謝積累,細胞即進入停止期或退化期。
3.營養(yǎng)液
正常情況下,培養(yǎng)液呈桃紅色。如果細胞維持在pH6.5~6.6條件下,細胞會脫落死亡。當細胞工廠內培養(yǎng)液酸化變黃時,說明培養(yǎng)液中代謝產物已堆積到一定量,需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5%CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對穩(wěn)定。
4.微生物污染
微生物污染培養(yǎng)細胞培養(yǎng)物后會出現(xiàn)pH值改變,培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀。細菌感染后,由于細菌的運動,光鏡觀察細胞工廠內可見有微閃光;真菌感染則在鏡下見許多細絲狀菌絲,有時還密集有群集孢子;支原體的污染需要借助一些檢測手段才可檢出。
這就是富道細胞為大家分享的細胞工廠培養(yǎng)細胞時四個觀察方面,希望對大家有所幫助。